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PCR - Polymerase Chain Reaction
Em 1993, Kary Mullis, um geneticista ao serviço da Cetus, uma empresa de Biotecnologia da Califórnia, recebeu o prémio Nobel da Química pelo desenvolvimento de um método que permite sintetizar, em poucas horas e in vitro, uma grande quantidade de um determinado fragmento de DNA. Esta técnica faz parte integrante da moderna biotecnologia molecular, tendo trazido um enorme progresso a áreas como o diagnóstico de doenças, medicina forense entre muitas outras para além da Investigaçao em Biologia.
Esta técnica é processada num termociclador.
Constituintes de uma reacção de PCR:
-DNA que queremos amplificar;
-Primer 5´
-Primer 3´
-dNTPs
-Magnésio;
-Taq polymerase
-Tampão
-Água
A técnica de PCR (polymerase chain reaction - reacção em cadeia pela polimerase). Durante o PCR são usadas elevadas temperaturas de forma a separar as moléculas de DNA em duas cadeias simples, permitindo então a ligação de oligonucleótidos iniciadores (primers), também em cadeia simples e geralmente constituidos por 15 a 30 nucleótidos, obtidos por síntese química. Para amplificar uma determinada região são necessários dois iniciadores complementares das sequências que flanqueiam o fragmento de DNA a amplificar, nos seus terminais 3´, de modo a permitir a actuação da DNA polimerase durante a síntese da cadeia complementar, usando como molde cada uma das duas cadeias simples constituintes do DNA a amplificar.
Quando uma reacção acaba podem-se fazer inumeras coisas com o DNA amplificado, como por exemplo uma electoforese.
Nota: Em caso de duvida, consultar glossário de termos cientificos!
Em 1993, Kary Mullis, um geneticista ao serviço da Cetus, uma empresa de Biotecnologia da Califórnia, recebeu o prémio Nobel da Química pelo desenvolvimento de um método que permite sintetizar, em poucas horas e in vitro, uma grande quantidade de um determinado fragmento de DNA. Esta técnica faz parte integrante da moderna biotecnologia molecular, tendo trazido um enorme progresso a áreas como o diagnóstico de doenças, medicina forense entre muitas outras para além da Investigaçao em Biologia.
Esta técnica é processada num termociclador.
Constituintes de uma reacção de PCR:
-DNA que queremos amplificar;
-Primer 5´
-Primer 3´
-dNTPs
-Magnésio;
-Taq polymerase
-Tampão
-Água
A técnica de PCR (polymerase chain reaction - reacção em cadeia pela polimerase). Durante o PCR são usadas elevadas temperaturas de forma a separar as moléculas de DNA em duas cadeias simples, permitindo então a ligação de oligonucleótidos iniciadores (primers), também em cadeia simples e geralmente constituidos por 15 a 30 nucleótidos, obtidos por síntese química. Para amplificar uma determinada região são necessários dois iniciadores complementares das sequências que flanqueiam o fragmento de DNA a amplificar, nos seus terminais 3´, de modo a permitir a actuação da DNA polimerase durante a síntese da cadeia complementar, usando como molde cada uma das duas cadeias simples constituintes do DNA a amplificar.
Quando uma reacção acaba podem-se fazer inumeras coisas com o DNA amplificado, como por exemplo uma electoforese.
Nota: Em caso de duvida, consultar glossário de termos cientificos!
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